А. Н. Комиссаренко, А. М. Ковалева,
С. В. Ковалев, В. В. Чаусов

Липотропная активность карденолидов

Украинская фармацевтическая академия

Возникновение сердечно-сосудистых заболеваний взаимосвязано с нарушениями липидного и углеводного обмена в организме. Развитие ожирения вызывает нарушения в процессах микроциркуляции и транскапилляторного обмена, вследствие этого замедляются окислительно-восстановительные реакции, водно-солевой обмен, ухудшается трофика тканей, что может привести к недостаточности кровообращения, ишемии, миокардиодистрофии, сердечно-сосудистой недостаточности [2, 9]. В связи с этим интересно было изучить влияние сердечных гликозидов на ферментативную активность липазы.

Нами были исследованы некоторые карденолиды, выделенные из растений семейств Apocynaceae, Asclepiadaceae, Brassicaceae, Fabaceae и Ranunculaceae.

Обсуждение результатов

Были получены шесть соединений: конваллатоксин и цимaрин из Adonis volgensis L., корхорозид А из Syrenia montana (Pall.) Klok. (S. sessiliflora (DC.) Ledeb.) и E. witmannii Zawadski, а также гомфотин из Gomphocarpus fruticosus (L.)R.Br., уабаин (G-строфантин) из Strophantus gratus Franch. и олеандрин из Nerium oleander L.

Экстракцию, выделение и идентификацию веществ проводили с помощью методов, описанных в фитохимических работах [3, 5–12].

Структура и физико-химические свойства выделенных веществ представлены в таблице 1.

Липотропная активность определялась с помощью модифицированного нами метода, в основу которого положен способ определения ферментативной активности липазы [1].

В результате исследования установлено, что строфантидин-гликозиды ингибируют действие липазы, а именно: корхорозид А подавляет активность липазы на 77,78%, цимарин — на 66,67% и конваллатоксин — на 55,56% (табл. 2).

Примечание к табл. 2. Относительная активность липазы в данном опыте составляет 0,045 мм/мин.

Известно, что структура сахарной части сердечных гликозидов влияет на степень биологической активности в организме, путем изменения проницаемости клеточной мембраны, прочности связей с рецепторами и др. По степени кардиотонической активности эти гликозиды размещаются таким образом: корхорозид А имеет LD100 = 0,077мг/кг, конваллатоксин — LD100 = 0,079мг/кг, цимарин — LD100 = 0,111 мг/кг (на кошках) [9].

По-видимому, и в случае взаимодействия с ферментом in vitro на липотропную активность изучаемых монозидов влияют сахарные остатки, а также их характер связи с агликоном. Но, прямой зависимости между кардиотонической и липотропной активностью мы не обнаружили.

Уабаин (G-строфантин) инактивирует действие липазы. Его формула отличается от конваллатоксина наличием двух гидроксильных групп в положениях С1 и С11 , а также спиртовым (вместо альдегидного) радикалом в положении С10. Гомфотин ингибирует активность липазы на уровне 77,78%, олеандрин — на 66,67%.

Экспериментальная часть

1. Выделение сердечных гликозидов проводили из обезжиренного сырья, а также из обезжиренного сырья, подвергнутого затем аутоферментации. Для этого 300,0 г сырья увлажняли 100 мл воды, сверху заливали 5 мл толуола и оставляли на 4 суток при температуре 36–380. Проферментированное сырье обрабатывали 10-кратным количеством 80% спирта, извлечение концентрировалили до водного остатка (250 мл), который обрабатывали 300 мл диэтилового эфира. Водный остаток последовательно обрабатывали хлороформом (1,2 л) и хлороформно-спиртовой смесью (3:1; 1,5 л). Хлороформную (I) и хлороформно-спиртовую фракцию (II) упаривали и хроматографировали на колонке окиси алюминия: соотношение сорбента и разделяемой смеси — 70:1. Колонку элюировали хлороформом и хлороформно-спиртовыми смесями, увеличивая концентрацию спирта до 10%. Из I фракции получили агликоны карденолидов, из II — гликозиды.

2. Идентификацию веществ проводили путем сравнения физико-химических свойств со свойствами достоверных образцов.

Хроматографию карденолидов проводили на нейтральной окиси алюминия. Температуру плавления определяли на блоке Кофлера. УФ-спектры снимали на спектрофотометре СФ-26, ИК-спектры на приборе UR-20 в таблетках KBr. Оптическое вращение определяли на приборе ЭПЛ-IА. Спектры дисперсии оптического вращения получали на приборе СПУ-М.

Определение липотропной активности

20 мг агликона растворяли в эфире и смешивали с 2 мл раствора оливкового масла в эфире концентрации С = 0,005·10–3 моль/л или С = 15·10 –7 моль/1мл. Микропипеткой отбирали 0,01 мл полученной смеси, доводили эфиром до 1 мл и наносили на предметное стекло площадью 4 см 2 0,1 мл. После испарения эфира на предметное стекло наносили каплю объемом 2 мм 3 раствора липазы в буфере с рН = 9 с концентрацией 1,4·10 — 3 мг/мл (содержание белка в липазе не менее 0,7 мг/мл). Наблюдения за увеличением диаметра капли вели с помощью микроскопа в течение 20 мин., диаметр капли измеряли через каждые 5 мин.

Параллельно проводили контрольный опыт в таких же условиях, но без добавления исследуемых веществ. Так как раствор триолеина концентрации 5·10–6 моль/л объемом 0,1 мл на поверхности стекла площадью 4 см2 образует мономолекулярный слой, то скорость растекания капли липазы или увеличение ее диаметра (мм/мин) может служить величиной относительной, характеризующей активность липазы [2]. В опыте с гликозидами 20 мг вещества растворяли в приготовленном буферном растворе с липазой. Опыты проводили в 5–6 повторностях. Кинетика влияния карденолидов на липазную активность отражена в диаграмме.

Соотношение скорости липазы в слое триолеина с карденолидом к скорости липазы в контрольном опыте характеризует уровень воздействия карденолида на липазную активность. В таблице липотропная активность карденолидов выражена в процентах.

Выводы

1. Впервые установлена ингибирующая липотропная активность карденолидов in vitro.
2. Определена различная степень активности монозидов строфантидина; установлена ее зависимость от природы сахарного остатка.
3. Выявлено, что степень активности карденолидов коррелирует с количеством гидроксильных групп в агликоне.

Литература

1. А. с. 484223 СССР КЛ ФО 7 G7/00.1975.
2. Большая медицинская энциклопедия: в 30 тт. АМН СССР. 3-е изд.— М.: Советская энциклопедия.— Т. 13.— 1980.— 552 с; Т. 23.— 1984.— 544 с.
3. Георгиевский В. П., Комиссаренко Н. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений.— Новосибирск: Наука, 1990.— 330 с.
4. Даниленко В. С., Чубенко А. В., Нижерадзе Т. И./Анализ динамики исследований по созданию новых лекарственных средств в развитых странах (аналитический обзор)//Фармакологічний вісник.— 1990.— № 2.—С. 24–36.
5. Зоз И. Г., Комиссаренко Н. Ф., Черных Н. А./Буфадиен-карденолидосодержащие растения флоры СССР//Растительные ресурсы.— 1967.— Т. 3.— Вып. 2.— С. 276–288.
6. Ковальов С. В., Макаревич І. Х., Ковальов В. М./Дослідження карденолідів жовтушника Віттмана//Вісник фармації.— 1996.— № 1–2.— С. 123–124.
7. Комиссаренко Н. Ф., Лушпа О. У. Карденолиды и флавоноиды Syrenia sessiliflora.— Химия природных соединений.— 1976.—№ 5.—С. 671–672.
8. Комиссаренко Н. Ф., Чернобай В. Т., Комиссаренко А. Н./Карденолиды и флавоноиды Gomphocarpus fruticosus//Растительные ресурсы.— 1997.— Т. 33.— Вып. 1.— С. 29–41.
9. Малая Л. Т., Макаревич И. Ф., Ковганко Н. В., Горб Ю. Г. Сердечные гликозиды.— Харьков: Основа.— 1996.— 464 с.
10. Общая характеристика кардиостероидов/Комиссаренко А. Н., Кисличенко В. С., Ковалева А. М., Ковалев В. Н., Ковалев В. Н., Ковалев С. В.— Харьков: Основа,1997.— 87 с.
11. Пономаренко А. А., Комиссаренко Н. Ф., Стуккей К. Л./Карденолиды Adonis wolgensis//Химия природных соединений.— 1971.— № 5.— С. 661–662.
12. Яцюк В. Я., Комиссаренко Н. Ф., Гелла Э. В./Химический состав надземной части Adonis volgensis Steven.— Растительные ресурсы.— 1975.— Т. 11.— Вып. 4.— С. 515–516.