Яковлева Л. В., Кальф-Калиф С. С., Ткачева О. В.

Фармакологическое изучение новой ранозаживляющей мази «Пролидоксид»

Украинская фармацевтическая академия, г. Харьков
Центральная научно-исследовательская лаборатория (ЦНИЛ)

Натуральный продукт пчеловодства — прополис — с давних времен применяется в народной медицине для лечения заболеваний внутренних органов и наружных кожных покровов. Фармакологические свойства прополиса очень разнообразны. Он обладает антисептической, противогрибковой, антимикробной и противовирусной активностью. Кроме того, оказывает ранозаживляющее, антиоксидантное, противовоспалительное действие, стимулирует регенерацию тканей и повышает иммунологическую реактивность организма [1–3].

Основные биологические свойства прополиса объясняются наличием значительных количеств фенольных соединений. Широкий диапазон, эффективность действия, экономичность технологии выделения позволяют использовать природные фенолы прополиса в медицинской практике. В связи с этим в Украинской фармацевтической академии, под руководством академика А. И. Тихонова, была выделена субстанция фенольного гидрофобного препарата прополиса (ФГПП), основными компонентами которой являются фенольные соединения. На ее основе разработана новая лекарственная форма — мазь «Пролидоксид» [4]. Мазь создана на полиэтиленоксидной основе, в состав препарата входит местный анестетик — лидокаин.

Широкий спектр антимикробной активности фенольных соединений, анестезирующее действие лидокаина, местное воздействие ПЭО, способствующее очищению ран от гнойного содержимого позволяет предположить использование мази «Пролидоксид» для лечения ран и ожогов на I фазе раневого процесса. Целью наших исследований явилось изучение антимикробной, противовоспалительной и ранозаживляющей активности мази «Пролидоксид».

Материалы и методы

Антимикробное действие мази «Пролидоксид» изучали методом диффузии в агар — метод «колодцев» [5]. В качестве тест-культур использовали эталонные штаммы, полученные из ГИСК им. Л. А. Тарасевича: грамположительные кокки — Staphylococcus aureus ATCC 25922; Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853; грамположительные бактерии — Bacillus subtilis шт. 8236 и грамотрицательные палочки — Escherichia coli АТСС 25923.

О степени активности препарата судили по диаметру зоны задержки роста микроорганизмов.

С целью изучения противовоспалительной активности была использована модель термического воспаления лапы [6]. В опыте использовали белых мышей массой 20–25 г. У животных вызывали ожог задней правой лапки путем погружения в горячую воду с температурой 66,50 С на 4 секунды. После этого лапку животных одной опытной группы смазывали исследуемыми мазями. Животных одной опытной группы лечили мазью «Пролидоксид». В качестве препарата сравнения на данной модели воспаления использовали аналог по фармакологическому действию, а также препарат природного происхождения — широко известную ранозаживляющую мазь «Вундехил». Этот препарат является эффективным средством при травмах поверхности тела и содержит в своем составе природные компоненты: ланолин, облепиховое масло, пчелиный воск, каротилен, прополис, экстракты лекарственных растений Алтая, Крыма и Восточной Украины.

У контрольных животных лапку не лечили. Через 24 часа мышей забивали дислокацией шейных позвонков. Отечную и неотечную лапки отрезали на уровне голеностопного сустава, взвешивали на торсионных весах ВТ-500 и вычисляли разницу в массе [6]. Противовоспалительную активность препаратов в процентах определяли по формуле 1:

A = 100 % - ( Роп * 100 % ) / Рк

А — противовоспалительная активность;
Рк — средняя разница в массе отечной и неотечной лапы в контроле;
Роп — средняя разница в массе отечной и неотечной лапы в опыте.

Полученные данные обрабатывали статистически, используя критерий Стьюдента (Р) [7].

Учитывая антимикробную и противовоспалительную активность мази «Пролидоксид», целесообразно было изучить ее ранозаживляющее действие, для чего использовали модель ожоговых ран. Поскольку мазь «Вундехил» по противовоспалительной активности оказалась менее эффективной, чем мазь «Пролидоксид», то для изучения ранозаживляющего действия был выбран другой препарат-аналог, близкий к мази «Пролидоксид» по составу — импортная ранозаживляющая мазь прополисовая 3% (Польского производства). Препарат содержит экстракт прополиса и является эффективным средством для лечения гнойных ран, термических ожогов, язв, пролежней.

В эксперименте использовали крыс массой 250–300 г по 6 животных в группе. На выстриженном участке спины размером 4 х 4 см2 под барбамиловым наркозом у животных вызывали термический ожог. Для этого использовали прибор с установленной температурной шкалой и электропаяльником, на конце которого крепится металлическая пластина размером 2,5 х 2,5 см2 [8–9]. Данный метод позволяет получить стандартные ожоги по площади и глубине всей толщи кожи. Время экспозиции нагретой до 2000С контактной пластинки составляло 10 сек. При соблюдении этих условий ожог кожи у животных соответствовал IIIА степени клинической классификации ожогов [10].

Опытных животных распределяли на 3 группы. Крысам первой опытной группы ожоговую рану лечили мазью «Пролидоксид», второй — мазью прополисовой 3%, а животных контрольной группы не лечили. Лечение начинали на второй день после воспроизведения ожогов. Об общем состоянии животных судили на основании поведенческих реакций, аппетита, массы тела, выживаемости. Клинические наблюдения процессов заживления ожоговых ран проводили на 2, 5, 8, 9, 13, 16, 19, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 сутки и в более поздние сроки, т. е. до полного заживления ран. В эти сроки регистрировали состояние раны, проводили измерение площади раны, прикладывая к ране прозрачный трафарет. Кроме того, о темпах заживления ожоговых повреждений судили по скорости заживления ран, которую вычисляли по формуле 2:

V = ( Sмакс - Sопыт ) / Sопыт

Sмакс — максимальная площадь раны (в нашем опыте на 8-й день)
Sопыт — площадь раны в день измерения.

Фиксировали также % животных с зарубцевавшимися ранами (таблица 3). Полученные цифровые данные обрабатывали статистически, используя критерий Стьюдента [7].

Результаты и их обсуждение

Результаты исследования антимикробной активности мази «Пролидоксид» представлены в таблице 1.

Как видно из результатов, 5% мазь «Пролидоксид» обладает антимикробным действием в отношении всех исследованных возбудителей раневой гнойно-септической инфекции: стафилококка, кишечной, сенной и синегнойной палочек, что дает возможность использовать препарат для лечения гнойных ран и гнойно-воспалительных заболеваний кожных покровов.

Результаты изучения противовоспалительной активности мази «Пролидоксид» представлены в таблице 2.

* — отклонение статистически достоверно по отношению к контролю, Р Ј 0,05

Как видно из представленных результатов, разница в массе отечной и неотечной лапы в опытных группах, леченных препаратами, достоверно отличается от показателя в контроле, причем в группе животных, леченых мазью «Пролидоксид», эта разница меньше, что свидетельствует о ее более выраженном действии. Таким образом, на модели термического воспаления лапы у мышей, мазь «Пролидоксид» проявляет противовоспалительную активность на уровне 38,5%, что в 2 раза превышает действие препарата сравнения — мази «Вундехил» (18,6%).

Результаты изучения ранозаживляющего действия препаратов на модели ожоговой раны представлены в таблице 3.

Примечание:
1) * — отклонение достоверно по отношению к контролю, P Ј 0,05;
2) ** — отклонение стремится к достоверному по отношению к контролю, 0,1 і Р > 0,05.

Из представленных результатов видно, что площадь ран у животных, леченных мазью «Пролидоксид» и 3% мазью прополисовой, начиная с 21-х суток опыта достоверно отличается от результатов контрольной группы. Это свидетельствует о выраженном репаративном действии как мази «Пролидоксид», так и 3% мази прополисовой. Причем полное заживление у животных, леченных мазью «Пролидоксид», наступило на одни сутки раньше (26-е сутки), чем у животных, леченных препаратом сравнения (27-е сутки). Полное заживление ран у животных контрольной группы завершилось на 30-е сутки опыта с образованием грубого рубца, который рассасывался медленнее (5–6 дней), чем в опытных группах (1–3 дня).

Таким образом, мазь «Пролидоксид» на модели ожоговых ран у крыс проявила ранозаживляющую активность на уровне ее аналога — 3% мази прополисовой.

Выводы

1. При экспериментальном фармакологическом изучении активности мази «Пролидоксид» установлено антимикробное действие по отношению к стафилококку, синегнойной, сенной и кишечной палочкам, выраженное противовоспалительное и ранозаживляющее действие препарата.
2. Установленное в доклинических исследованиях комплексное фармакологическое действие мази «Пролидоксид» позволяет рекомендовать ее для клинических испытаний в качестве ранозаживляющего препарата для лечения гнойных ран, воспалительных инфильтратов, ожогов легкой и средней степени, пролежней.

Литература

1. Лудянский Э. А. Апитерапия: Вологда, 1994.— 458 с.
2. Омаров Ш. М. Целебные тайны продуктов пчеловодства.— Махачкала: Даг. кн. изд-во, 1997.— 328 с.
3. Починкова П. Пчелиные продукты в медицине (Апитерапия).— Апимондия: София, 1995.— 271 с.
4. Тихонов А. И., Ярных Т. Г., Черных В. П. и др. Теория и практика производства лекарственных препаратов прополиса/Под ред. акад. А. И. Тихонова.— Харьков: Основа, 1998.— 384 с.
5. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран/ Москва, 1989.— 48 с.
6. Гацура В. В. методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ.— М.: Медицина, 1974.— 123 с.
7. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.— 1963.— С. 81–106.
8. Мищук И. И., Нагайчук В. И., Гомон Н. Л.//Клин. хирургия.— 1994.— № 4.— С. 21–22.
9. Сыров В. Н., Хумбактова З. А., Жмарко Т. Г., Глушенкова А. И.//Хим.-фарм. журнал.— 1994.— № 4.— С. 47–49.
10. Бурмистров В.М., Калметов Б. М. Местное консервативное лечение ожогов//Ожоги: Руководство для врачей.— Л.: Медицина, Ленингр. отд.,1981.— С. 123–134.