|
Лысоченко Л. М., Котов А. Г., Подпружников Ю. В., Гладченко С. В. Разработка методов стандартизации препаратов эхинацеиГосударственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков ВведениеВ последнее время определенную популярность приобрели фитопрепараты, включающие в состав эхинацею пурпурную — Echinacea purpurea Moench сем. Asteraceae. Это связано с тем, что препараты эхинацеи оказывают лечебное действие при различных по своему характеру патологических состояниях за счет повышения естественных защитных сил организма [1–3]. Большинство авторов связывают фармакологическое действие эхинацеи с наличием водорастворимой фракции полисахаридов и липофильной, основную часть которой составляют ненасыщенные алкиламиды [1–5]. По данным литературы, в состав эхинацеи входят различные классы химических соединений: полисахариды и сахара, производные кофейной кислоты (содержание цикориевой кислоты — 0,6–2,1%), фенольные соединения (флавоноиды, дубильные вещества пирокатехиновой природы — 5,56–5,67%), эфирные масла (0,01–0,24%), ненасыщенные алкиламиды (изобутиламиды — 0,0004–0,039%) и др. [2–6]. Поэтому подходы к стандартизации как растительного сырья, так и препаратов эхинацеи у разных авторов различны. Российские исследователи в работе [7] предлагают модифицированную методику количественного определения содержания гидроксикоричных кислот (в пересчете на цикориевую кислоту) в надземной части эхинацеи пурпурной. Авторы ссылаются на литературные источники, где указано, что именно цикориевая кислота, а также полисахариды обладают антимикробным и иммуностимулирующим действием. В работе [2] авторы в обсуждении стандартизации препаратов эхинацеи описывают идентификацию настойки корня эхинацеи пурпурной методом ТСХ по наличию изобутиламидов высших полиненасыщенных кислот в системе циклогексан — эфир — метанол (7:2:1), в качестве веществ сравнения используют тимол, анетол, пирокатехин. Вероятнее всего, биологическая активность препаратов эхинацеи обусловлена синергетическим действием всех указанных классов соединений, поскольку не всегда подтверждается действие на иммунную систему выделенного в чистом виде полисахаридного комплекса, липофильной фракции растения и т. д. [2, 3] Цель настоящей работы — представить результаты аналитических исследований по стандартизации настойки из корней и корневищ эхинацеи пурпурной. Экспериментальная часть и обсуждение полученных результатовПри выборе класса веществ для стандартизации настойки из корней и корневищ эхинацеи пурпурной мы руководствовались следующими соображениями: в корнях эхинацеи пурпурной в достаточно большом количестве содержится полисахарид инулин [8]. Предварительные исследования химического состава настойки эхинацеи показали, что он присутствует в препарате в достаточных количествах для стандартизации. В связи с этим в тесте «Подлинность» в дополнение к хорошо известной реакции, основанной на свойстве полисахаридов выпадать в осадок в водных растворах при избытке спирта 96% [9], методом ТСХ идентифицировали фруктан — инулин и фруктозу. Свой выбор мы остановили на пластинках «Kieselgur F254», рекомендованных в литературе для деления сахаров [10]. В процессе разработки методики были опробованы несколько систем с различными растворителями: изопропанол — этилацетат — вода (6:1:3); изопропанол — этилацетат — вода (3:1:3); 50% этанол — этилацетат (5:1); 70%; 60%; 55%; 50% этанол. Сложность выбора системы была обусловлена необходимостью разделения фруктозы и полисахарида, состоящего из 34–35 звеньев D-фруктозы В качестве оптимальной системы был выбран 55% этанол. Для проявления пятен хроматограмму последовательно обрабатывали растворами резорцина и кислоты серной разведенной, затем нагревали при температуре 1000С. В качестве стандартного образца вещества-свидетеля используется только фруктоза, так как инулин, полученный из различных источников, дает плохо воспроизводимые результаты. В процессе разработки методики мы использовали образец инулина, выделенный сотрудниками ГНЦЛС. В АНД нормировали только интервал Rf инулина, полученный в результате исследований разных серий настойки эхинацеи. На хроматограмме препарата пятно, соответствующее инулину, находится непосредственно над пятном, соответствующим фруктозе. В процессе эксперимента на хроматографическую пластинку параллельно с пробами препарата (непосредственно настойки), стандартного образца фруктозы и инулина наносили также фракцию полисахаридов, полученную в разделе «Количественное определение». Пятно на хроматограмме препарата находилось на одном уровне с пятном образца инулина и пятном на хроматограмме выделенной полисахаридной фракции, что позволило с достаточной степенью надежности идентифицировать инулин (Rf в интервале 0,80–0,87) в настойке эхинацеи. Сырье — корневища с корнями эхинацеи пурпурной — по ВФС 42У-44-193-96 стандартизуется по наличию изобутиламидов высших полиненасыщенных кислот методом ТСХ. Методику, с использованием аналогичных условий, для идентификации изобутиламидов в настойке эхинацеи, мы считаем нецелесообразным включать в аналитическую нормативную документацию (АНД) на препарат, поскольку нет четкого деления хроматографических зон с воспроизводимыми пределами Rf. По-видимому, это связано с незначительным содержанием алкиламидов в самом сырье и, соответственно, в настойке, при этом отсутствуют какие-либо стандарты или ссылки на значения Rf идентифицируемых соединений. Количественное определение инулина в настойке проводили спектрофотометрическим методом по поглощению продуктов взаимодействия фруктозы, образовавшейся после расщепления инулина, с резорцином в кислой среде [11]. Для определения содержания именно инулина предварительно была проведена процедура извлечения полисахаридов: осаждение с последующим растворением в воде. В качестве стандарта была выбрана фруктоза, исходя из соображений, изложенных выше. Спектры поглощения продуктов реакции взаимодействия раствора препарата с резорцином в кислой среде и раствора стандартного образца фруктозы практически идентичны. Расчет содержания инулина в препарате проводится по удельному показателю поглощения продуктов реакции взаимодействия фруктозы с резорцином, экспериментально установленному и совпадающему с данными литературы (с поправкой на то, что приведенный в работе [11] удельный показатель рассчитан без учета последнего разведения). Метрологические характеристики методики представлены в табл. 1. На основании проведенных исследований содержание инулина в настойке из корней эхинацеи пурпурной нормируется — не менее 0,1%.
В результате исследований по определению гидроксикоричных кислот в настойке из корня и корневищ эхинацеи пурпурной после предварительного удаления липофильной части установили, что их содержание в пересчете на цикориевую кислоту (удельный показатель поглощения взят из работы [7]) составило около 0,3%. Однако оптимизация данной методики для включения в АНД без стандартного образца цикориевой кислоты в настоящее время невозможна. Использовать же в данном случае в качестве стандарта другие доступные кислоты (хлорогеновую, коричную) некорректно. С целью максимально объективной стандартизации сырья эхинацеи и препаратов на ее основе исследования по количественному определению других соединений, обуславливающих биологическую активность, будут продолжены. ВыводыВ результате проведенных исследований подобраны оптимальные условия для идентификации инулина и фруктозы в настойке эхинацеи методом тонкослойной хроматографии. Предложена объективная методика определения количественного содержания инулина в настойке из корня и корневищ эхинацеи пурпурной. Разработанные методики введены в нормативно-аналитическую документацию. Литература
© Провизор 1998–2022
|
Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
Как и чем лечить кашель?
Безрецептурные лекарства при сухом и влажном кашле Устойчивость микробов к антибиотикам →
Помогает ли одежда из шелка лечить экзему?
Что лучше развивает ребёнка — книжки с картинками или с текстом? О безопасности автокресел для детей в возрасте от 4 до 12 лет
Аллергический ринит
Забеременеть в 40 Лечение бесплодия. Обзор существующих вариантов Аденома простаты. Как и чем лечить ? |
||||||||||||||||||||||
|