Логотип журнала "Провизор"








Ю. Л. Волянский, И. Г. Сапожников, М. В. Живица

О противовирусной активности и токсических эффектах препарата Афлубин

Харьковский НИИ микробиологии и иммунологии им. И. И. Мечникова,
представительство фирмы «Хербс Трейдинг ГмбХ»

Проблема поиска эффективных противовирусных препаратов обусловлена высокой заболеваемостью и широкой распространенностью вирусных инфекций, сопровождающихся частым развитием затяжных и хронических форм, тяжелыми последствиями для детей раннего и лиц преклонного возраста.

Несмотря на интенсивный скрининг, проводимый во всем мире, количество противовирусных препаратов при ряде инфекций ограничено, а при некоторых инфекционных заболеваниях их совсем нет.

В значительной степени это объясняется особенностями паразитизма вирусов, поражающих геном клетки. С этим связано важное требование к изысканию противовирусных препаратов, которые должны либо непосредственно воздействовать на сам вирус, не повреждая клетки, в которой он паразитирует, либо обладать способностью активации выработки эндогенного интерферона. Все это определяет трудности поиска эффективных в условиях организма препаратов, хотя в экспериментальных условиях in vitro нередко многие вещества могут вызвать прямое ингибирующее действие на внеклеточный вирус.

Учитывая изложенное, для изучения противовирусного действия предполагаемых веществ важно проводить опыты на культурах клеток человеческого или животного происхождения, к которым адаптированы и хорошо пассируются на них исследуемые вирусы. В качестве тест-вирусов использовали РНК- и ДНК-содержащие вирусы, поражающие респираторный и кишечный тракт.

Цель исследования

Изучение токсичности на культурах клеток и некоторых механизмов противовирусной активности известного противогриппозного гомеопатического средства Афлубина.

Материалы и методы исследования

Изучение токсичности и определение максимально переносимой концентрации (МПК) Афлубина. Для определения безвредности различных лечебных средств в последние годы все шире применяется метод клеточных культур. Это связано с тем, что современные способы, применяемые с целью контроля безвредности препаратов на лабораторных животных, не всегда достаточно чувствительны для определения токсичности. Для определения МПК использовали двухсуточные культуры клеток с хорошо сформированным монослоем клеток. Учет результатов проводился по наличию или отсутствию цитотоксического действия на растущие клетки. Степень цитотоксического действия определяли по изменению морфологии клеток (округление и сморщивание клеток, отторжение от стекла дегенерированных клеток) по четырехплюсовой системе от 0 до ++++. МПК определяли по максимальному количеству вещества, не вызывающего цитопатического действия на клетки. Как видно из приведенных в таблице 1 данных, Афлубин не вызывал видимых цитопатических изменений ни в одной из использованных клеточных культур.

Таблица 1
Результаты изучения токсичности Афлубина в отношении перевиваемых клеток различного происхождения
Вид клеток Kол-во опытов Kонцентрация препарата в % Результат (токсичность)
1 сутки 2 сутки 5 сутки 7–8 сутки
ПТ 5 1% 0 0 0 +
5 5% 0 0 0 ±
5 10% 0 0 0 +
5 25% 0 0 ± +
5 50% 0 0 + ++
Тг 5 1% 0 0 0 +
5 5% 0 0 0 +
5 10% 0 0 0 +
5 25% 0 0 + +
5 50% 0 0 + ++
Hela 5 1% 0 0 0 +
5 5% 0 0 0 ++
5 10% 0 0 0 +
5 25% 0 0 + ++
5 50% 0 0 + ++
Нер-2 5 1% 0 0 0  
5 5% 0 0 0 ++
5 10% 0 0 + +
5 25% 0 0 0 +
5 50% ± ± ++ +++
Kонтроли клеточных культур ПТ - - - +
Тг - - - +
Hela - - + ++
Нер-2 - - + ++

Примечание: «0» — отсутствие ЦПД; «+ – +++» — различная степень ЦПД

Изучение инактивирующего действия Афлубина на вирус гриппа А (Н3N3). Афлубин в виде раствора на питательной среде Хенкса вводили куриным эмбрионам в аллантоисную полость в дозе 0,2 мл одновременно с вирусом в рабочей дозе (100 ЭИД50/ 0,2 мл). Зараженные и незараженные (контроль) эмбрионы инкубировали при 36°С в течение 48 часов. Титрование вируса в аллантоисной жидкости проводили по общепринятой методике с 1% эритроцитами 0 (1) группы человека. Определяли коэффициент защиты (КЗ) и индекс защиты (ИЗ) согласно «Методическим указаниям по методам испытания и оценки противовирусной активности химических соединений в отношении вируса гриппа» и «Методических подходов к оценке клеточной защиты при гриппе». Было установлено, что все серии при одновременном введении препарата и вируса имели сравнительно низкий коэффициент и индекс защиты куриных эмбрионов в отношении вируса гриппа А (Н3N2) (таб 2).

Таблица 2
Действие Афлубина на вирус гриппа А (Н3 № 2)
Kоличество зараженных куриных эмбрионов Из них с вирусом Kоэффициент защиты (KЗ) Индекс защиты в % (ИЗ)
кол-во %
Афлубин 15 12 84,2 1,1 14
Kонтроль 15 15 100,0    

Изучение противовирусной активности Афлубина. Проведено изучение препарата с целью выявления как прямого его антивирусного действия, так и опосредованного посредством индукции интерферона клетками. Для этого в опыте использовали культуру клеток Тr (перевиваемые клетки трахеи крупного рогатого скота) с тест-вирусом VVS (вирус везикулярного стоматита) в рабочей дозе. Афлубин в количестве 0,2 мл вносили в пробирки за 30 минут до и после внесения тест-вируса. Опыт сопровождали контролями культуры клеток, препарата и вируса. Учет производили после срабатывания вируса в контроле. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3
Изучение прямого и косвенного действия препарата Афлубин нa VVS
Афлубин (концент-
рация)
Kол-во опытов Внесение Афлубина через 30 мин. после заражения VVS Внесение Афлубина за 30 мин. до заражения VVS Kонтроль Афлубина Kонтроль культуры Kонт-
роль VVS
0.1% 5 ++ + 0 0 ++++
0,5% 5 ++ + 0 0 ++++
1% 5 + 0 0 0 ++++
2% 5 0 0 0 0 ++++
5% 5 0 0 0 0 ++++

Примечание: «0» — отсутствие ЦПД, «+ — +++» — наличие ЦПД

Установлено, что Афлубин предохраняет клетки от заражения вирусом, что подтверждено отсутствием цитопатогенного эффекта в отношении клеток, обработанных препаратом за 30 минут до внесения вируса, что, по-видимому, связано с индукцией интерферона клетками даже при кратковременном воздействии Афлубина в испытуемой дозе.

Исследование индукции эндогенного интерферона Афлубином в опытах in vivo и in vitro. Интерфероногенную активность препарата изучали в организме мышей и на культуре клеток. Белым мышам вводили препарат в различных концентрациях в объеме 0,2 мл внутрибрюшинно. Через 3, 12, 24 и 72 часа у мышей брали кровь, получали сыворотки и титровали на содержание интерферона.

Таблица 4
Результаты изучения степени индукции интерферона in vivo и in vitro Афлубином
Дозы Афлубина Kол-во живот-
ных
Титры интерферона (ед/мл) в сывороткax мышей В культураль-
ной жидкости
3 ч 12 ч 24 ч 72 ч
0,1% 20 320 40 60 36 512
0,5% 20 512 128 82 60 1024
1% 20 640 320 180 110 1024
2% 20 640 320 180 120 1024
5% 20 320 320 90 100 1024
Kонтроль 10 0 0 0 0 0

Однослойные культуры клеток Tr (перевиваемые клетки трахеи эмбриона крупного рогатого скота) обрабатывали теми же растворами Афлубина в течение 4 часов, а затем собирали культуральную жидкость, в которой определяли активность интерферона. За единицу интерферона принимали то наибольшее разведение сыворотки или культуральной жидкости, которое задерживает 100 ЦПД50 вируса в пробирочных культурах. Как видно из таблицы 4, Афлубин уже в первые 3 часа стимулирует выработку интерферона (в максимальных количествах) у мышей и в культуре клеток. Срок выработки интерферона сохранялся до 72 часов. Следовательно, в опытах in vivo и in vitro препарат Афлубин оказывает достаточно высокую степень индукции эндогенного интерферона, чем вероятно и обусловлена его выраженная профилактическая и эндогенная эффективность в клинике.

Таблица 5
Максимально переносимые дозы и кумулятивные свойства Афлубина
Животные Kол-во животных Способ введения Доза (мкг/кг) и режим введения Индекс кумуля-
ции, %
n = 1 n = 14
МПД1 LD50 МПД1 LD50
белые мыши 20 подкожно 460 926 318 714 13%
20 внутри-
брюшинно
296 578 264 420 18%
20 внутривенно 300 520 248 360 31%
20 в желудок 926 1660 720 1212 27%
белые крысы 20 подкожно 500 914 388 618 33%
20 внутри-
брюшинно
342 627 300 510 19%
20 внутривенно 264 500 216 360 28%
20 в желудок 1020 1840 892 1280 31%

Изучение токсичности и кумулятивных свойств Афлубина. Исследования выполнены в соответствии с «Методическими рекомендациями по представлению документации на лекарственные средства в Фармакологический комитет Министерства здравоохранения Украины», Киев, 1993. Острая токсичность исследовалась на трех видах млекопитающих при подкожном, внутримышечном и внутрижелудочном путях введения, а также на культурах клеток. Кумулятивные свойства и обратимость токсического эффекта в хроническом опыте у белых мышей и белых крыс определены с помощью методики Черновой В. А. Как следует из таблицы 5, при сравнении максимально переносимых и половинных летальных доз при однократном и двухнедельном режимах введения Афлубина кумуляция его побочного действия не выражена, что подтверждается полной обратимостью токсического эффекта.

Таким образом, проведенные исследования показали, что:

  1. Препарат Афлубин обладает невыраженной прямой противовирусной активностью в отношении тест-штаммов гриппа А (Н3N2), корона-, адено- и везикулярного стоматита.
  2. Препарат Афлубин обладает весьма выраженной способностью индуцировать интерферонообразование в опытах in vitro (в культурах клеток) и in vivo (белые мыши).
  3. Препарат Афлубин не обладает цитопатогенным действием на клетки перевиваемых культур.
  4. Препарат Афлубин по результатам исследования острой и хронической токсичности при различных способах введения лабораторным животным трех видов оказался малотоксичным (V класс токсичности по классификации С. Д. Заугольникова), обладает весьма слабыми кумулятивными свойствами с полной обратимостью токсического эффекта.

Материал предоставлен представительством фирмы «Хербс Трейдинг Гмбх» в Украине
За дополнительной информацией обращаться по адресу: 254070, г. Киев, а/я 106, тел.: (044) 417-02-43, 417-02-46





© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика